荷青花〔Hylomecon japonica（Thunb.） Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕為罌粟科荷青花屬植物，多年 生早春類短命植物，分布于我國東北至華中、華東地區(qū)。 荷青花全草具有祛風(fēng)除濕、舒筋活血、消腫止痛等功效。 目前文獻(xiàn)中有關(guān)荷青花全草的化學(xué)成分僅為生物堿 類、酚類、皂苷類等化合物。

1 材料、儀器與試劑 

1.1 試驗(yàn)材料 

荷青花全草于 2015 年 6~8 月采自吉林省雙陽市， 經(jīng)洗滌、干燥后保存于實(shí)驗(yàn)室，備用，經(jīng)吉林大學(xué)藥學(xué) 院生藥學(xué)教研室張靜敏教授鑒定為荷青花〔H．japonica（Thunb.）Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕。

1.2 儀器與試劑 

Varian UNITYINOVA2400核磁共振儀（BRUKER 公司）；LDI1700-TOF-MS激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 儀（惠普公司）；LC-10AT高效液相色譜儀（島津公司）； SHB-IIIA循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器有 限責(zé)任公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化 儀器有限責(zé)任公司）；精宏DHG-9030A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥 箱（上海精宏公司）；KQ-250B 型超聲波清洗器（昆山 市超聲儀器有限公司）；D-101 吸附型大孔樹脂（天津 農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司）；薄層色譜硅膠 GF254 （青島海洋化工廠）；柱色譜硅膠（青島恒澤硅膠制品有限 公司）；所用試劑均為分析純（北京化工集團(tuán)有限公司）。 

2 提取與分離 

2.1 浸提 

干燥的荷青花全草，經(jīng) 70%乙醇浸提，過濾，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)器濃縮后得到提取物浸膏，備用。 

2.2 洗脫 

將濃縮得到的提取物浸膏上樣于預(yù)處理過的 D101 大孔吸附樹脂柱并進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑條件為 乙醇（0%、10%、30%、50%、70%、95%），薄層色譜監(jiān)測發(fā) 現(xiàn)，10%乙醇洗脫效果較好，故收集得到 10%乙醇洗脫 物。 

2.3 分離 

將10%乙醇洗脫物反復(fù)進(jìn)行硅膠柱色譜分離，展開劑 條件為氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶1.8∶4.0∶1.0）， 分離 4 次得到A、B、C、D 4 個(gè)組分，將 4 個(gè)組分經(jīng)薄層 色譜與硅膠柱色譜多次分離。薄層色譜展開劑條件為 氯 仿∶ 甲 醇∶ 乙 酸 乙 酯∶ 水∶ 甲 酸 （1.5∶3.5∶4.0∶0.5∶0.5），硅膠柱色譜展開劑條件為 氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶2.5∶4.0∶1.0），最 終得 A1、B1、C2、C4、D1 和 D2 6 個(gè)組分。 

2.4 純化

 將分離得到的 6 個(gè)組分經(jīng)高效液相色譜純化，色 譜條件為色譜柱：Gemini 5 m C1（8 250 10 mm）；檢測 波長：254 nm；流速：3.0 mL/min；進(jìn)樣量：50 L；柱溫： 25 ℃；流動(dòng)相：乙腈（A）與 0.1%甲酸（B）。洗脫條件 （A1、B1：0~9.00 min CB 97%，9.01~30.00 min CB 97%~90%；C2：0~30.00 min CB 85%~70%；C4： 0~13.00min CB 76%；D1、D2：0~10.00min CB72%），分 別得到化合物 1~7。 

3 結(jié)構(gòu)鑒定 

3.1 化合物 1

室溫下為白色粉末，易溶于甲醇，10%硫酸-乙醇 加熱顯色為黃色，Molish 反應(yīng)陽性，說明該結(jié)構(gòu)連有 糖基。HR TOF-MS m/z：[M+Na]+ 443.1144，結(jié)合 13CNMR、1H-NMR 得出分子式為 C17H24O12。1H-NMR （400MHz, DMSO-d6） ：8.14（1H, d, J=5.6Hz, H-6）， 6.44（1H, d, J=5.6Hz, H-5），2.50（1H, s, H-7），4.70（1H, d, J=7.6Hz, H-1'），3.57（2H, d, J=9.2Hz, H-6'），3.28（m, H-3'），3.32（m, H-5'），3.39（m, H-2'），3.42（m, H-4'）， 4.81（1H, d, J=2.8, H-1''），3.81（1H, d, J=2.2Hz, H-2''）， 4.24（1H, t, J=12.8Hz, H-4''），3.57（2H, s, H-5''）；13CNMR（100MHz, DMSO-d6） ：15.1（-CH3），174.2 （C-4），161.5（C-2），155.8（C-6），141.7（C-3），116.1 （C-5），109.1（C-1''），103.6（C-1'），78.8（C-3''），76.2 （C-2''），75.8（C-4''），63.2（C-5''），75.8（C-3'），73.7 （C-5'），73.2（C-2'），69.8（C-4'），67.4（C-6'）。上述信號(hào) 歸屬是通過 HMQC、H-H COSY、HMBC 二維核磁共 振譜完成的。以上理化常數(shù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)、1H-NMR、13CNMR數(shù)據(jù)與一致，故化合物 1 鑒定為麥芽醇-6' -O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡萄糖苷（maltol-6'-O- - D-apiofuranosyl-glucop-yranoside）。

3.2 化合物 2 

室溫下為黃色油狀物，易溶于甲醇，10%硫酸-乙 醇加熱顯色為紅棕色，三氯化鐵反應(yīng)陽性，說明該結(jié)構(gòu) 為酚類化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-D6） ：7.73 （2H, m, H-3'），7.69（2H, m, H-4', H-6'），7.65（1H, m, H-5'），4.24（1H, dt, J=6.4Hz, H-1），4.14（1H, dt, J=6.4Hz, H-2'），2.51（1H, m, H-3），1.67（1H, m, J=6.8Hz, H-7），1.42（2H, m, J=15.2Hz, H-2），1.31（4H, m, J=12Hz, H-4, H-5），1.23（2H, m, J=13.2Hz, H-6）， 0.93（3H, d, J=7.2Hz, H-8），0.89（3H, d, J=7.4Hz, H-9）， 0.86（3H, t, J=5.1Hz, H-10）；13C-NMR （100MHz, DMSO-d6）：167.0（C-1'），131.7（C-2'），131.6（C-3'）， 131.5（C-7'），128.6（C-4', C-5', C-6'），67.4（C-1），38.1 （C-3），30.0（C-7），29.8（C-4），28.3（C-2），23.2（C-5）， 22.4（C-6），13.9（C-9），13.5（C-8），10.8（C-10）。1HNMR、13C-NMR，故鑒定化合物 2 為 3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（3,7-dimenthyl-n-octan-1-ethyl benzoate）。

4 結(jié)果與討論 

運(yùn)用醇提法對采集自吉林省長春市雙陽區(qū) 的荷青花全草植物進(jìn)行了處理，采用多種色譜分離技 術(shù)對荷青花全草植物提取物進(jìn)行分離得到了 7 個(gè)化合 物，結(jié)合每個(gè)化合物的理化常數(shù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)、1H-NMR、 13C-NMR數(shù)據(jù)，最終得到 7 個(gè)單體化 合物，分別為麥芽醇-6'-O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡 萄糖苷（1）、3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（2）、苯甲酸丁 酯（3）、苯甲酸乙酯（4）、香草酸（5）、香草酸甲酯（6）、咖 啡酸-1-O- -L-呋喃阿拉伯糖苷（7）。1~7 化合物均是 首次從荷青花全草植物中分離得到，其中化合物 1 為 罌粟科中首次分離得到。本試驗(yàn)的結(jié)果為進(jìn)一步探究 該植物的藥理作用提供了科學(xué)依據(jù)，為荷青花的化學(xué) 成分和藥理活性提供了一定的參考。

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