牙科種植修復(fù)已經(jīng)成為牙列缺損或牙列缺失的一種 常規(guī)治療手段，純鈦及其合金作為種植體材料具有良好的 生物相容性。隨著口腔種植研究的不斷發(fā)展，簡化治療流程，縮短治療時(shí)間，提高種植手術(shù)的遠(yuǎn)期成功率是目前最 為關(guān)注的問題。其根本解決辦法是對種植體表面進(jìn)行生化 改性，以期加快形成種植體骨結(jié)合，早期功能負(fù)載，有效降低術(shù)后種植體周圍炎的發(fā)生率。

純鈦片（99.99%，陜西寶雞鵬 潤新金屬材料有限公司）、蒲公英多糖（95%，陜西慈緣生物技術(shù)有限公司）、牙齦卟啉單胞菌（廣東省微生物研究所）、臺盼藍(lán)（北京雷根生物技術(shù)有限公司）、BHI血 瓊脂平板（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、直流恒壓 電源（DPM8600，杭州鈞策器械股份有限公司）、厭氧工 作站（上海萬銳實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）、場發(fā)射掃描電鏡 （Merlin，德國）、X射線光電子能譜儀（THERMO FISHER SCIENTIFIC，美國）、倒置熒光顯微鏡（OLYMPUS，日本）

商業(yè)圓形純鈦片（10mm× 10mm×1mm）依次經(jīng)800# 、1000# 、1200# 鷹派砂紙打磨，丙 酮、乙醇、去離子水超聲清洗，每次15min，空氣中干燥備 用。在玻璃燒杯中配制300ml電解液（乙二醇97vol%、氟化 銨0.5wt%、水3vol%）。連接直流恒壓電源，將鈦片置于陽 極，鉑片置于陰極，設(shè)置氧化電壓20V，氧化時(shí)間2h。氧化 完成后鈦片置于450℃高溫馬弗爐中燒結(jié)3h，乙醇、去離子 水超聲清洗，每次5min，鈦片清洗完成后置于烘烤箱中干 燥備用。

稱取一定量的蒲公英多糖粉末溶于無水乙醇/DMSO (DMSO＜1vol%)，分別配 制濃度為50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml的蒲公英多糖溶 液。將陽極氧化處理的鈦片分別置于三種不同濃度的多糖 溶液，超聲振蕩處理30min。去離子水漂洗鈦片，去除表面 未負(fù)載的多糖，空氣中干燥備用。設(shè)置陽極氧化鈦片為對 照組（A組），陽極氧化鈦片負(fù)載不同濃度的蒲公英多糖為 實(shí)驗(yàn)組：多糖濃度50mg/ml（B組），100mg/ml（C組）， 200mg/ml（D組）。

FESEM結(jié)果：對照A組鈦片表面可見管 徑均勻的納米管陣列，納米管管壁光滑，直徑約80～100nm （圖1a）。實(shí)驗(yàn)組（B、C、D組）鈦片表面可見納米管表面 及管內(nèi)有白色粟粒狀顆粒物沉積（圖1b、圖1c、圖1d）。 圖中可以看出顆粒物的量與負(fù)載蒲公英多糖的濃度呈正相 關(guān)，D組＞C組＞B組。

XPS檢測結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組（B、C、D 組）和對照組（A組）鈦片表面均含有C、N、O元素，實(shí)驗(yàn) 組特征性C元素峰值顯著增高，且與負(fù)載蒲公英多糖的濃度 呈正相關(guān)，D組＞C組＞B組。 2.3 牙齦卟啉單胞菌(Pg)臺盼藍(lán)染色：臺盼藍(lán)染色結(jié)果： 熒光顯微鏡下觀察活菌呈現(xiàn)透明，死菌被染成藍(lán)色。實(shí)驗(yàn) 組（B、C、D組）鈦片表面死菌數(shù)量顯著高于對照組（A 組），各實(shí)驗(yàn)組間鈦片表面死菌數(shù)量與負(fù)載蒲公英多糖的 濃度呈正相關(guān)，D組＞C組＞B組。

隨著現(xiàn)代納米技術(shù)的發(fā)展，材料表面納米化改性已成為增加鈦 種植體表面粗糙度的一種優(yōu)良方法。有學(xué)陣列者研究表明， 采用乙二醇-氟化銨水溶液為電解液，陽極氧化電壓為20V， 氧化時(shí)間為2h的條件下，可制備出高度有序的TNTs。本 實(shí)驗(yàn)采用相同的氧化參數(shù)成功在鈦片表面制備出二氧化鈦 納米管，場發(fā)射掃描電鏡下觀察納米管結(jié)構(gòu)規(guī)整，直徑約 80～100nm，管壁光滑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與以往研究相一致。二氧化鈦納米管負(fù)載蒲公英多糖復(fù)合涂層的抗菌性： 上海精宏認(rèn)為目前公認(rèn)菌斑聚集是導(dǎo)致種植體周圍炎的始動因子，聚集 在種植體周圍的菌斑主要為革蘭氏陰性厭氧菌，尤其是牙 齦卟啉單胞菌。為了研究蒲公英多糖改性的納米管的抗 菌性，本研究選定了牙齦卟啉單胞菌為研究對象。實(shí)驗(yàn)采 用臺盼藍(lán)染色法檢測牙齦卟啉單胞菌活性，正常活菌胞膜 結(jié)構(gòu)完整，排斥臺盼藍(lán)染液進(jìn)入菌體，當(dāng)細(xì)菌活性喪失， 胞膜通透性增加，因而被染成藍(lán)色。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，染 色后顯微鏡下觀察到實(shí)驗(yàn)組鈦片表面死菌數(shù)量顯著高于對 照組（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組中負(fù)載高濃度多糖的納米管表面 死菌數(shù)量高于負(fù)載中濃度多糖的納米管（P＞0.05）和負(fù)載 低濃度多糖的納米管（P＜0.05），可以得出二氧化鈦納米管負(fù)載蒲公英多糖復(fù)合涂層對牙齦卟啉單胞菌具有較強(qiáng)的 抗菌性，在一定范圍內(nèi)，抗菌活性與蒲公英多糖濃度成正 相關(guān)關(guān)系。關(guān)于蒲公英多糖的抗菌機(jī)制，有研究表明，蒲 公英多糖可抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，促使細(xì)胞壁破裂，還 能抑制DNA和蛋白質(zhì)的合成。有關(guān)蒲公英多糖抑制牙齦 卟啉單胞菌活性的具體作用機(jī)制尚不清楚，有待后續(xù)實(shí)驗(yàn) 進(jìn)一步研究。